环保之家讯：1、10%中性甲醛的配制
材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶

称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。


2、染色液的配制

材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸

称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。

3、培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。

4、.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。

5、注意事项：

脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。各有操作差异。以下是各论坛方法小结，不全。

（1）.完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。

（2）.细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。

（3）.如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚。

6、染色步骤：

（1） 先小心轻缓倒去培养夜。

（2） 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。

（3）加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。

（4） 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
（5）染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。

（6）脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
（7） 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。

（8）甘油明胶封片（封片后可长期保存）。

（9）显微镜观察。


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