环保之家讯：血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

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原理:将血清脂蛋白用脂类染料（如苏丹黑或油红O等）进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后，脂蛋白向正极移动，并分离为几个区带。操作:1．预染血清：血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中，混合后置37℃水浴染色30分钟，然后离心（2000转/分，约5分钟）。2．制备琼脂糖凝胶板：将已配制的0.45%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片，每片2.5ml，静置约半小时后凝固（天热时需延长，可放冰箱数分钟加速凝固）。3．点加血清：已凝固的琼脂糖凝胶板的一端约2cm处，用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出，然后用铜丝小匙将长方小条凝胶取出。以小片滤纸吸干小槽中水分，用血色素吸管吸取经过预染的血清约15μl，注入凝胶板上的小槽内。4．电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽中，样品应在阴极一端。两块三层纱布于巴比妥缓冲液中浸润，然后轻轻紧密贴在凝胶板两端，纱布的另一端浸于电泳槽内的巴比妥缓冲液（注意：此电极缓冲液不能用三羟甲烷缓冲液代替）。接通电源，电压为120~130V，每片电流为3~4mA。约经电泳15至55分钟，即可见分离之色带。结果及临床意义:1．正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从负极到正极依次为β-脂蛋白（最深）、前β-脂蛋白（最浅）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。2．如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，结合血清甘油三酯明显升高和胆固醇正常或略高，可以定为Ⅳ型高脂蛋白血症。3．如果β-脂蛋白区带比正常血清明显深染者，同时结合血清总胆固醇明显增高、甘油三酯正常者为Ⅱa型；若结合血清总胆固醇增高而甘油三酯略高的前β略溶者为Ⅱb型。4．结果β-和前β-两区带分离不开连在一起称“宽β区带”，结合血清甘油三酯和胆固醇均有所增高，可定为Ⅲ型。5．如果原点出现乳糜微粒，β，前β均正常或减低，结合血清甘油三酯明显升高，可定为Ⅰ型。注意事项:1．电泳样品要求为新鲜的空腹血清。2．每一块凝胶上可平行挖两条小槽，因而可加两个样品。3．如果用一形状大小和小槽一样的有机玻璃片，在琼脂糖胶凝固前固定于适当位子上，当凝固后取出有机玻璃片，凝胶板上留下小槽可直接加样，不需挖槽。4．如果需要保留电泳样本，可将电泳后之凝胶板（连同玻片）放于清水中浸泡脱盐2小时，然后放烘箱（80℃左右）烘干即可。试剂与器材:1．巴比缓冲液（pH8.6，离子强度0.075）：为电极缓冲液巴比妥钠15.4g，巴比妥2.76g，EDTA酸0.292g，加水溶解后加水至1000ml2．三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.6）为凝胶缓冲液三甲基氨基甲烷1.212g，EDTA酸0.29g，NaCl 15.85g加水溶解后加水至1000ml3．琼脂糖凝胶琼脂糖0.45g，三痉甲基氨基甲烷缓冲液50ml，水50ml加热至沸，待琼脂糖溶解后立即停止加热。4．挖槽工具制作切口刀：刀口长15mm的刀片，中央夹一有机玻璃或木片，用螺丝固定，使两刀片相距1.5mm。挖槽小匙：用直径1.5mm的铜丝约6cm长，一端锤成扁平，用砂纸磨光。5．电泳槽和电泳仪：同血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的仪器。环保之家为您提供最全面的环保,环保用品,净化,空气净化,环保净化品牌的装修知识点和各种环保净化的导购与在线购买服务,拥有最便宜的环保净化价格和最优质的售后服务,每天都有秒杀的抢购活动哦！敬请登陆环保之家：http://huanbao.jc68.com/